欧阳文英  唐玮蔚  刘美玲

湖南省长沙医学院基础医学院生物化学与分子生物学教研室 湖南长沙 410219

【摘要】：随着我国医学教育改革的不断深入，医学教育的目标已发展为培养高素质、强能力、具有创新精神的综合型人才。医学实验教学是医学人才培养的重要环节，根据我院的实际情况，生化实验的实验项目按照“基础性实验”“综合性实验”“设计创新性实验”三大板块进行开设，联系后续课程内容及临床。然而我院本科医学生的生化实验，有一部分实验由于受到了学时不足、开设难度大的限制。为了解决这一难题，我们生化实验室运用了“倒叙法”合理缩短了学时，科学的开设实验。下面我将就我们实验室开设的几个采用“倒叙法”的实验进行阐述。

【关键词】：生化实验 倒叙法 科学

为了适应高等医学院校基础医学实验教学的发展要求，培养医学生的实践能力和创新能力，我院针对全院本科医学生的生物化学教学内容进行了合理的调整，增加了有利于学习掌握生物化学新技术，培养学生科研能力的较大型综合创新性实验。原则上我院要求本科生生物化学实验在四学时内完成，然而聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳、醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白质和蔗糖酶与淀粉酶的专一性这几个实验四个学时是远远不够的。在教学要求与教学条件的矛盾冲突下，我们实验室就采用倒叙法来顺利完成这些实验。

聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳实验按照正常的操作顺序应该是：1.制备分离胶；2.制备浓缩胶；3.准备电泳槽；4.上样；5.电泳；6.剥胶；7.固定、染色、漂洗；8.观察结果。而我们实验室则采用“倒叙法”第一轮实验所需要的凝胶包括分离胶和浓缩胶都由实验室的老师准备就绪，往后每一轮实验所需的凝胶由上一轮实验的同学制备，将这个实验分段同时进行。具体操作则变为1.准备电泳槽；2.上样；3.电泳：电泳所需要的时间大概需要一个小时左右。在这一个小时跑电泳的时间里，我们可以完成后续的实验内容；4.制备分离胶；5.浓缩胶制备；6.剥胶；7.固定与染色、脱色；8.观察结果。合理地运用时间来完成这个实验。

醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白质的实验中我们首先也是先电泳以后再具体讲原理和操作步骤以及方法。按照正常的程序应该是先讲实验目的、实验原理、实验器材与试剂，然后再重点讲解实验步骤，讲完以后同学们再开始操作。然而我们先简单的介绍一下实验操作，然后开始点样，点完样以后再上样再进行电泳。电泳跑上了以后我们再继续接着讲实验目的、实验原理、实验器材与试剂，再详细介绍实验步骤，每一个步骤需要注意的注意事项。薄膜准备：一般要浸泡半个小时以上，每一次都由实验室的老师先准备好。仪器准备：剪裁尺寸合适的“滤纸桥”是用来联系醋酸纤维薄膜和两极缓冲液之间的中间 “桥梁”（也由实验室的老师准备好）。点样；电泳：调节电压，预电泳（50V，5min），然后再调节至120V左右，通电45分钟，待电泳区带展开至薄膜三分之二处时，停止通电。染色：用镊子小心将薄膜取出，浸于氨基黑10B染色液中染色1-3分钟。漂洗：漂洗3次干净的薄膜用滤纸吸干，可见5条界限清晰的区带。定量分析：剪下薄膜各蛋白色带分别放入NaOH溶液中，30分钟后去测其吸光度值。计算：计算各蛋白的相对百分含量和A/G比值。这样有效地缩短了学时，圆满地完成了实验。

蔗糖酶与淀粉酶的专一性实验中实验的操作步骤：1.酵母蔗糖酶提出液制备：取鲜酵母（面包酵母）1小勺，放在小试管内，倒入甲苯1～2ml用粗玻璃棒搅拌约30～45分钟使酵母液化，然后加蒸馏水3～5ml，充分混匀。3000转/分离心10分钟，倾弃上清液，保留沉淀于小试管中，加蒸馏水1.5ml，甲苯0.2ml，混匀，在30℃水浴中过夜。次日取出，用玻棒搅匀，一边搅拌一边加3～5％稀醋酸，调节pH至3.5～4.0（用pH试纸测试），离心（3000转/分）10分钟。将上清液倾入洁净的烧杯内，加入少量硅藻土（约一小匙），混匀，3000转/分离心5分钟。上清液用氨水中和至pH 5左右，放4℃冰箱保存备用。使用前可根据实验需要的活性大小适当稀释。2. 准备稀释唾液（淀粉酶的来源）：实验者先用水漱口，然后含一口蒸馏水于口中轻漱一、二分钟，吐入小烧杯中。3.取6支试管按表格依次加入试剂，每管混匀后置于37℃恒温水浴中保温30min。另取大试管6支，每支试管中加Benedict试剂1ml（约20滴），加热煮沸后，分别将保温后的试管中液体加入之，继续煮沸2分钟，放试管架上冷却，观察并记录结果。解释实验结果。操作步骤中要求在30℃水浴中过夜，所以过夜这一部分的内容由实验室的老师提前给同学们准备好。同学们从次日取出开始操作，做完以后在保温的30min时间里再做过夜的这一部分，做完又可以给下一个班的同学使用，这样轮回倒转法来使我们的实验有序完成。

这些实验运用“倒叙法”在我院已通过多年的实践，在圆满完成本实验的全面教学的同时，让原来的四个学时完成不了的成为可能。既满足了人才培养的教学需要，又克服了学时不足的现实条件，为实现创新人才培养目标，促进实验教学改革奠定了基础。

【参考文献】

黄春霞,龙昱.生物化学与分子生物学实验教程[M].北京：北京大学医学出版社,2014

欧阳文英，唐玮蔚;；临床专业认证中生物化学实验的改革与实施[J];考试周刊;2014年96期

胡桔红，欧阳文英，汤婷，王琳，李帆，刘立鹏；；如何科学的开设聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳[J];青春岁月；2012年23期