李德法，陈娟，王烨

（厦门市妇幼保健院医学检验科，福建厦门 361000）

［摘要］目的 初步分析EDTA依赖性血小板减少的现象及原因。方法 用三种方法对EDTA-K2诱导血小板假性减少患者的血小板和白细胞进行分析。结果 EDTA-K2抗凝血与枸橼酸钠抗凝血和手工法的血小板结果在不同时间段均有统计学差异(P<0.05)；>30min时EDTA-K2抗凝血与枸橼酸钠抗凝血和手工法测定白细胞结果均有统计学差异(P<0.05)；EDTA-K2 抗凝血涂片均可见血小板成团成簇聚集，末梢血涂片和各个时间段的枸橼酸钠抗凝血血小板均为散在分布。结论 及时与临床沟通，同时重抽EDTA-K2抗凝静脉血和枸橼酸钠抗凝静脉血，并马上送到检验科化验，以降低血小板假性聚集的可能。

［关键词］血小板假性减少；抗凝剂；EDTA-K2；枸橼酸钠

Contrastive analysis of the results by three methods in 10 cases of patients with pseudo-thrombocytopenia caused by EDTA-K2 anticoagulation

LI De-fa,CHEN Juan,WANG Ye

 (Department of Clinical Laboratory,Xiamen Maternal and Children′s Hospital,Xiamen 361000)

Abstract: Objective To investigate the phenomenon and causes of EDTA-dependent thrombocytopenia. Method Using three ways to analyze the platelet and leukocyte in patients with pseudo-thrombocytopenia caused by EDTA-K2 anticoagulation. Results In all time periods, the platelet counts of EDTA-K2 anticoagulated venous blood showed statistically significant difference from the results obtained by sodium citrate anticoagulated venous blood and manual methods(P<0.05). And the leukocyte counts of EDTA-K2 anticoagulated venous blood showed statistically significant difference from the results obtained by sodium citrate anticoagulated venous blood and manual methods after 30 min(P<0.05). Microscopic examination of the blood smear showed that platelets aggregate into clot in all periods in EDTA-K2 anticoagulated venous blood, while the peripheral blood and sodium citrate anticoagulated venous blood appeared scattered in the distribution in all periods. Conclusion Timely communication with the clinical, take both EDTA-K2 anticoagulated venous blood and sodium citrate anticoagulated venous blood immediately, can reduce the possibility of platelet aggregation.

Key Words: Pseudo thrombocytopenia; Anticoagulants; EDTA-K2; Citrate sodium 

随着血细胞分析仪的推广，由于抗凝剂乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)对血细胞的形态、体积影响很小，在临床广泛应用。但我们在工作中发现极少数人标本可在EDTA-K2诱导下使血小板假性减少，导致临床误诊。本文对在厦门市妇幼保健院使用EDTA-K2抗凝剂而引起血小板假性减少的10例患者的血小板和白细胞结果进行分析，报告如下。

1 材料与方法

1.1 检测对象

选取2015年6月至9月在我院住院的患者，首次使用EDTA-K2抗凝静脉血在SYSMEX XS-1000i血细胞分析仪检测血小板结果明显降低，推片染色镜检发现血小板有聚集现象，手工计数在正常范围内，体表检查无出血点、瘀斑、瘀点等血小板减少症状，临床诊断为EDTA依赖性血小板假性减少患者10例，均为女性，年龄20岁-40岁。

1.2 仪器与试剂

(1)SYSMEX XS-1000i全自动血细胞分析仪及其配套试剂和质控品；(2) EDTA-K2抗凝管、枸橼酸钠抗凝管为福州长庚医疗器械有限公司提供；(3)光学显微镜（OLYMPUS）；(4)瑞氏-姬姆萨染液为珠海贝索公司生产；(5)按照标准操作规程配制血小板稀释液及白细胞稀释液［1］。

1.3 方法

1.3.1 经患者同意，采集EDTA-K2和枸橼酸钠抗凝静脉血标本各一份，分别于10-15 min、20-25 min、>30 min在SYSMEX XS-1000i全自动血细胞分析仪上计数血小板和白细胞值。因枸橼酸钠抗凝剂与血液比例为1:9，故本文所有枸橼酸钠抗凝管计数结果均已乘以1.1校正。

1.3.2 采集患者末梢血，分别用微量吸管吸取20 μL末梢指血于380 μL的血小板稀释液和白细胞稀释液中，静置10 min后在显微镜下手工计数三次取其平均值。

1.3.3 取初次采集的末梢血，并分别在10-15 min、20-25 min、>30 min取EDTA-K2和枸橼酸钠抗凝静脉血，制作血涂片，用瑞氏-姬姆萨染液染色，显微镜下观察血小板的聚集与分布情况。

1.4 统计学处理

使用SPSS19.0软件进行统计分析，计量资料应用(x±s )表示，结果采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 EDTA-K2抗凝血、枸橼酸钠抗凝血、手工法测定血小板结果　

EDTA-K2抗凝血与枸橼酸钠抗凝血和手工法的血小板结果在3个不同时间段均有统计学差异(P<0.05)；手工法与枸橼酸钠抗凝血的血小板结果无统计学差异(P>0.05) ；EDTA-K2抗凝血的血小板随时间延长而降低, 枸橼酸钠抗凝血的血小板随时间延长未见明显改变(表1)。

表1 EDTA-K2抗凝血、枸橼酸钠抗凝血、手工法测定血小板结果 [(x±s )×109/L]

测定方法 10-15 min 20-25 min >30 min

EDTA-K2抗凝血（仪器法） 105±45 51±19 29±10

枸橼酸钠抗凝血（仪器法） 215±54 218±61 211±42

末梢血（手工法） 205±53* ― ―

注：*为10 min时计数结果。

2.2 EDTA-K2抗凝血、枸橼酸钠抗凝血、手工法测定WBC结果

10-15 min、20-25 min时3种测定方法的白细胞结果无统计学差异(P>0.05)；>30 min时EDTA-K2抗凝血与枸橼酸钠抗凝血和手工法测定白细胞结果均有统计学差异(P<0.05) (表2)。

表2 EDTA-K2抗凝血、枸橼酸钠抗凝血、手工法测定白细胞结果  [(x±s )×109/L]

测定方法 10-15 min 20-25 min >30 min

EDTA-K2抗凝血（仪器法） 7.2±3.1 7.5±2.8 7.8±3.1

枸橼酸钠抗凝血（仪器法） 7.4±2.7 7.2±3.1 7.3±3.2

末梢血（手工法） 7.3±2.9* ― ―

注：*为10 min时计数结果。

2.3 血涂片结果

三种血涂片经瑞氏染色镜检，EDTA-K2抗凝血涂片均可见血小板成团成簇聚集，且随时间延长血小板簇集增多; 而末梢血涂片和各个时间段的枸橼酸钠抗凝血血小板均为散在分布。

3 讨论

血小板降低是引起出血的常见原因之一，血小板在20-50×109/L时，可能存在轻度出血或术后出血症状，低于20×109/L时，可能存在较严重的出血；低于5×109/L时，可能导致严重的出血并可危及生命［2］。血小板计数的准确性直接影响临床对患者的诊治，及时发现血小板假性减少现象，选择正确的方法进行纠正尤为重要。

EDTA-K2通过与血液中的钙离子(凝血因子Ⅳ) 结合形成鳌和物，从而阻止血液凝固，但它偶尔可导致血小板聚集，发生血小板假性减少。而且溶血素无法破坏这种血小板的聚集体，它们的体积较大，使血细胞分析仪误认为是白细胞计数，使得白细胞结果相对升高[3]。当发生这种现象时，可用枸橼酸钠抗凝血在显微镜下计数或用血细胞分析仪计算血小板数量［4］，也可直接吸取末梢血置入血小板稀释液中计数，还有文献认为可用肝素钠作抗凝剂来纠正血小板数量［5］。本次实验结果表明，与枸橼酸钠抗凝血和手工法相比，EDTA-K2测定的血小板在10-15 min就明显减少，并随着时间延长不断降低，超过30 min后，白细胞计数也相对升高，而枸橼酸钠抗凝血和手工法相比无明显差异。

我们认为，为了检验结果的准确性，检验人员必须加强责任心，在实际工作中一旦在检验过程中发现EDTA-K2抗凝标本血小板明显降低与患者临床症状不符，应作如下检查：(1)查看血细胞分析仪的报警信息及血小板直方图尾部是否出现翘尾情况；(2)血涂片观察血小板的分布及形态；(3)要求临床同时重抽EDTA-K2抗凝静脉血和枸橼酸钠抗凝静脉血，并马上送到检验科化验，以降低血小板假性聚集的可能，减少患者不必要的医疗费用和痛苦。

4 参考文献

［1］叶应妩,王毓三,申子瑜.全国临床检验操作规程[M].第3版.南京:东南大学出版社,2006:123-124,136.

［2］熊立凡,刘成玉.临床检验基础[M].第4版.北京:人民卫生出版社,2010:67.

［3］刘丽波,张哲,赵殿凤,等.EDTA依赖性假性血小板减少症5例临床分析[J].中国临床研究,2011,24(1):60.

［4］张之南,单渊东,李蓉生,等.协和血液病学[M].北京:中国协和医科大学出版社,2004,631.

［5］郑云.三种方法对EDTA-K2抗凝剂引起血小板假性减少的检测及分析[J].临床医学工程,2011,18(12):1924.

 

作者简介：李德法（1973年9月），男，汉族，福建省泉州市，本科，主管技师，从事临床免疫学研究