刘小双1蒲旭峰2 罗霄2

1.成都中医药大学药学院四川成都 611137

2.成都市食品药品检测中心四川成都 610045

[摘要]目的：考察研究安神补心片中2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷含量的高效液相测定方法。方法：色谱柱：Welchrom C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相：乙腈-水（25:75）;流速：0.9ml/min;检测波长：320nm;柱温：25℃；进样量：10μl。结果：2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷在0.01967ug-0.19660ug范围内线性关系良好(，r=0.9999)，平均回收率为99.220%，RSD为0.54%(n=6)。结论：本方法操作简单，结果准确，专属性强，可用于控制该制剂的质量。

[关键词] 安神补心片；高效液相色谱法；2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷

安神补心片是由丹参、五味子（蒸）、石菖蒲、合欢皮、菟丝子、墨汉莲、女贞子（蒸）、首乌藤、地黄、珍珠母等10味中药加工而成[1]。功能主治养心安神，用于心血不足引起的心悸失眠，头晕耳鸣。安神补心片现行标准为国家药品标准（试行）WS-11407(ZD-1407)-2002[1], 为进一步控制药品内在质量，保证其临床用药安全有效，现参考文献[1] [2] [3] [4][5]，本文以2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷（以下简称二苯乙烯苷)为对象进行研究。

1 仪器和试药

高效液相色谱仪：Waters e2695(美国)；电子分析天平：METTLER AE-240（瑞士）；试药：乙腈为色谱纯(Sigma)，水为超纯水；其他试剂试药均为分析纯；对照品：二苯乙烯苷(批号：110844-201109，中国药品生物制品检定所)。

2 方法与结果

2.1 二苯乙烯苷含量测定

2.1.1 色谱条件

色谱柱：Welchrom C18 色谱柱(250mm×4.6mm, 5μm)；流动相：乙腈-水(25:75)；流速：0.9ml/min；检测波长：320nm；进样量：10μl，柱温：25℃；

2.1.2 对照品溶液的制备

取二苯乙烯苷对照品适量，精密称定，置棕色容量瓶中，加稀乙醇制成10.38μg/ml的溶液，备用。

2.1.3 供试品溶液的制备

将本品研细，取粉末约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50ml，称定质量，加热回流30min，放冷，再称定质量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，备用[2][3][5]。

2.1.4 阴性样品溶液的制备

本溶液是根据处方称取除首乌藤以外的其他药材适量制备阴性样品，再按2.13项下的供试品溶液的制备方法制备而成。

2.1.5 专属性试验

精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性样品溶液各10μl，，按2.1.1项色谱条件进样测定，记录色谱图（见图1）。结果表明，阴性样品无干扰。

 

 

2.1.6 线性试验

分别精密吸取对照品溶液（二苯乙烯苷含量为10.38μg/ml）2,4,6,8,10 ,20μl，按2.1.1项下的色谱条件进样测定，以二苯乙烯苷进样量为横坐标(X)，峰面积响应值为纵坐标(Y)，进行线性回归，得出二苯乙烯苷线性方程：Y=3.4852×106X+3.3981×103，r=0.9999。结果表明二苯乙烯苷在0.01967μg~0.19660μg的质量范围内的线性关系良好。

2.1.7 精密度试验

精密吸取二苯乙烯苷对照品溶液10μl，按2.1.1项下的色谱条件重复进样6次，计算峰面积 RSD为0.35%(n=6)。

2.1.8 回收率试验

NO. 称样量(g) 样品中含量(mg) 添加量(mg) 测得量

(mg) 回收率

(%) 平均回收率(%) RSD

(%)

1 1.0384 0.0976 0.0983         0.1945 98.576

 

99.220

 

0.54

2 1.0156 0.0955 0.0983 0.1932 99.390

3 1.0274 0.0966 0.0983 0.1945 99.593

4 1.0150 0.0954 0.0983 0.1936 99.898

5 1.0219 0.0961 0.0983 0.1930 98.576

6 1.0107 0.0950 0.0983 0.1926 99.288

称取同一批已知含量的安神补心片（批号：09030002）样品（含二苯乙烯苷0.094mg/g）约1g，分别精密称定6份，再精密加入二苯乙烯苷对照品适量（见表2），按2.13项下供试品溶液的制备方法制备样品，按2.1.1项色谱条件进样测定，记录峰面积，并计算加样回收率。结果平均回收率为99.220%， RSD为0.54%。

表 2 回收率试验结果

2.1.9 稳定性试验

精密吸取精密度项下同一供试品溶液(批号：09030002) ，按2.1.1项下的色谱条件，分别在配置后0、2、4、6、8h进样测定，二苯乙烯苷峰面积RSD=0.23%，结果表明供试品溶液在配置后8h内稳定。

2.2 样品含量测定

按照上述含量测定方法测定了3家制药企业8批安神补心片中二苯乙烯苷的含量，结果见表3。

NO. 批号   生产厂家 含量(mg•g-1) 平均含量(mg•g-1)

1 09030002 太极集团重庆桐君阁药厂有限公司 0.094

 

 

 

0.130

2 55100001 太极集团四川绵阳制药有限公司 0.214

3 55100002 太极集团四川绵阳制药有限公司 0.069

4 55100003 太极集团四川绵阳制药有限公司 0.138

5 55100005 太极集团四川绵阳制药有限公司 0.491

6 20111101 吉林百姓堂药业有限公司 0.0103

7 20111102 吉林百姓堂药业有限公司 0.0120

8 20111103 吉林百姓堂药业有限公司 0.0133

3 讨论

3.1为了充分提取安神补心片中的有效成分，参照《中国药典》(2010年版一部)[2]，中首乌藤的提取方法，本实验研究考察了超声提取、回流提取两种不同提取方法。结果表明：以回流提取所测得二苯乙烯苷含量更高。同时，本实验研究还考察了不同回流提取之间(15min、30min、60min)对二苯乙烯苷的影响，结果表明回流提取30min的提取效率最高，结果与范宋玲等[5]的报道研究一致。

3.2 通过紫外全波长扫描的光谱图进行分析，二苯乙烯苷在320nm处有最大吸收。参考《中国药典》2010年版一部首乌藤项下的含量测定，选用320nm为检测波长。

3,3 据陈龙虎[4]报道，二苯乙烯苷对光不稳定，在本文稳定性实验中，安神补心片供试品溶液在8h内基本稳定，因此应在测定时采取棕色瓶避光操作，并且尽量现配现用。

 

 [参考文献]

[1] WS-11407(ZD-1407)-2002，国家药品标准•中成药地方标准上升国家标准部分（内科心系分册）(S).

[2] 国家药典委员会.中华人民共和国（一部）[M].北京：中国医药科技出版社,2010:248-249

[3]彭爱华，宋军等. 高效液相色谱法测定安神补心片中二苯乙烯苷含量[J].中国药业，2013,22(9):16-17

[4]陈龙虎.高效液相色谱法测定七宝美髯口服液中二苯乙烯苷的含量[J].亚太传统医药，2013,9(3),23-24

     [5]范宋玲，孙冬梅等.首乌藤药材质量标准的研究[J].中国实验方剂学，2006,12(3),7-9