蔡翔

安阳职业技术学院，河南安阳，455000

摘要 目的：探讨基质金属蛋白酶（MMP-2）和乙酰肝素酶（HPSE）在肝细胞癌（HCC）中的表达及相关临床意义。方法：选取手术切除并经病理确诊的肝细胞癌石蜡标本80例，肝硬化组织标本26例，正常肝组织标本19例，应用免疫组化染色，检测MMP-2和HPSE在其中的表达情况。结果：肝细胞癌组织中的MMP-2和HPSE表达阳性率较肝硬化组织和正常肝组织中增高（均P<0.05）。在Ⅰ期、Ⅱ期及无转移的肝癌组织中，MMP-2和HPSE的阳性表达率低于Ⅲ期、Ⅳ期及发生肝内转移或门静脉转移的肝癌组织（均P<0.05）。此外，MMP-2的表达还与肿瘤的直径有关。结论：检测MMP-2和HPSE的表达情况对于判断肝细胞癌的转移、临床分期及预后有一定的价值。

关键词：基质金属蛋白酶；乙酰肝素酶；肝癌；转移

肿瘤的转移是一个受多因素影响、历经多个环节的连续过程，它会受癌细胞的黏附、增殖、扩散能力，水解细胞间质蛋白的能力以及新生血管的形成能力等影响。本课题通过免疫组化方法研究HPSE和MMP-2在肝细胞癌中的表达情况，探讨它们对肝癌细胞侵袭迁移能力的影响，为HCC诊断及预后评估的提供一定的理论依据。

1.材料与方法

1.1试验标本

选取2010年9月～2013年6月在安阳市肿瘤医院、安阳市第一人民医院手术切除并经病理确诊的80例HCC石蜡标本。其中男性61例，女性19例；年龄28～73岁，平均54岁；AFP值大于25ng/ml者52例，小于或等于25ng/ml者28例；发生了肝内转移或存在门静脉、胆道癌栓者28例，无转移者52例；术后临床分期按照国际抗癌联盟（UICC）第五版TNM分期法，其中Ⅰ期和Ⅱ期31例，Ⅲ期和Ⅳ期49例。所有患者术前均未行任何抗癌治疗。另外选取肝硬化组织标本26例，正常肝组织标本19例。所有标本均由安阳职业技术学院医药卫生学院病理教研室使用10%甲醛固定后，常规制作成4μm厚的连续石蜡切片，并进行免疫组化染色。

1.2免疫组化染色

标本行甲醛浸泡、石蜡包埋和连续切片。固定切片后采用免疫组化方法（SP法）对标本进行染色（阳性部位呈棕色或者棕黄色，对照部位呈蓝色）。

应用德国Lecia显微照像系统进行图像图象采集，光镜下将染色切片图象输入计算机，采用Biosens Digital Imaging System图象分析系统，根据染色差进行识别。每批实验设阳性和阴性对照。HPSE和MMP-2主要定位于胞浆，把含有棕黄色或棕褐色颗粒的肿瘤细胞计为阳性细胞。

1.3统计学分析

采用SPSS17.0软件进行统计分析, 计量资料采用均数±标准差（ ±s）表示，组间比较采用配对t检验，组内比较采用单样本t检验，率的比较采用χ2检验，P＜0.05具有统计学意义。 

2.结 果

2.1MMP-2在HCC中的表达情况

MMP-2阳性反应位于肝细胞浆、细胞间质、ECM中，未见细胞核染色。在80例肝癌组织中，MMP-2阳性表达率为70%（56例），在26例肝硬化组织中MMP-2阳性表达率为15%（4例），而在19例正常肝组织中无表达。与肝硬化和正常肝组织相比，MMP-2在HCC组织中表达明显增高，差异具有统计学意义（P＜0.05）。

在31例Ⅰ期和Ⅱ期HCC中，MMP-2阳性表达率为45.1%（14例），而在49例Ⅲ期和Ⅳ期HCC组织中，MMP-2阳性表达率为85.7%（42例），两者差异有统计学意义（P＜0.05）。MMP-2在发生了肝内转移或存在门静脉、胆道癌栓者28例HCC组织中阳性表达率为92.9%（26例），在无转移HCC组织中阳性表达率为57.7%（30例），两者差别有统计学意义（P＜0.05）。在肿瘤直径大于5cm的HCC中，MMP-2的阳性表达率为90.3%（28例），直径小于5cm的HCC中，MMP-2阳性表达率为57.1%（28例），两者差别有统计学意义（P＜0.05）。MMP-2的表达情况与年龄、性别、AFP值均无相关性（P＞0.05）。

2.2 HPSE在HCC中的表达情况

    HPSE阳性表达均位于细胞浆及细胞膜部位，细胞核内未见表达。HPSE在80例肝癌组织中阳性表达率为66%（53例），在26例肝硬化组织中阳性表达率为11%（3例），而在19例正常肝组织中无表达。与肝硬化和正常肝组织相比，HPSE在HCC组织中表达明显增高，差异具有统计学意义（P＜0.05）。

在31例Ⅰ期和Ⅱ期HCC中，HPSE阳性表达率为35.5%（11例），而在49例Ⅲ期和Ⅳ期HCC组织中，HPSE阳性表达率为85.7%（42例），两者差异有统计学意义（P＜0.05）。HPSE在发生了肝内转移或存在门静脉、胆道癌栓者28例HCC组织中阳性表达率为89.2%（25例），在无转移HCC组织中阳性表达率为53.8%（28例），两者差别有统计学意义（P＜0.05）。然而，HPSE的表达情况与年龄、性别、肿瘤大小、AFP值均无明显相关（P＞0.05）。     

3.讨论

肿瘤的转移和侵袭是两个相互联系的过程。相关研究表明，肝癌细胞的浸润、转移同样是肿瘤细胞突破了细胞外基质和血管基底膜，形成了新生血管[1]。这一过程是由多种分子和信号通路促成，这些分子推进了恶性肿瘤细胞在体内的侵袭过程，在癌症转移的恶性循环中起了关键性的作用[2]。

基质金属蛋白酶（MMPs）是一类酶活性依赖锌离子和钙离子的蛋白酶。MMPs参与机体多种生理和病理过程，在维持血管内皮形态和功能的完整性方面起着重要的作用。MMPs可以催化降解HCC细胞周围的基底膜组织，促进癌细胞的侵润、转移能力。研究发现，MMP-2对肿瘤细胞穿过内弹力板及细胞外基底膜等生物屏障的迁移过程，是一种必需的物质，并影响病程的发展，及血管再生、血栓形成、管壁破裂等并发症的产生。HCC细胞侵袭、转移的过程中，出现了ECM的增生、降解改变，这些变化部分由MMPs参与介导，在细胞迁移、细胞外基质降解的许多病理、生理过程中占用重要作用。

乙酰肝素酶（HPSE）是近年发现的哺乳动物体内唯一能够降解HSPG的一种葡萄糖酸内切酶。HPSE可通过破坏限制肝癌细胞侵袭、转移的细胞外基质和基底膜，从而促进肿瘤细胞的浸润和转移。越来越多的研究表明,HPA在几乎所有的中晚期恶性肿瘤中都高表达3,与肿瘤患者的预后不良关系密切4。

本实验表明：HPSE和MMP-2可作为检测HCC转移及判断恶性程度的一个重要指标，同时，作为重要的肿瘤靶向治疗位点，HPSE和MMP-2抑制剂的研究可为开发新型抗肿瘤药物提供更广阔的目标。

参考文献

[1] 李媛，张丽，孔花青等．乙酰肝素酶与肿瘤转移及血管生成的关系［J］．食品与药品，2011，13（1)：61-63. 

[2] 郭燕，刘文超．肝癌发生侵袭与转移分子机制的研究进展［J］．现代肿瘤医学，2014，22（4)：932-936.

[3] 朱辉，王士杰，单保恩等.乙酰肝素酶表达在食管鳞癌演发过程中的意义[J]．中国临床医学， 2008，15（4）：493-496.

[4] 张银辉，张有忠，朱国勇等．肝素酶与原发性肝细胞肝癌关系的研究进展［J］．国际检验医学杂志，2011，32（15)：1722-1723