邹航

广西医科大学第一临床医学院，广西南宁 530021

摘要：目的：探讨黄芩苷对人肝癌细胞HepG2增殖抑制及放疗增敏作用。方法：以人肝癌细胞株HepG2为研究对象，用CCK-8法和流式细胞仪检测黄芩苷对肝癌细胞增殖的影响和肝癌细胞放射敏感性的改变。结果：CCK-8法检测黄芩苷对HepG2的生长有显著抑制作用且具有剂量依赖性，与阴性对照组对比差异有统计学意义( P＜0. 05) 。黄芩苷能使处于G0/G1、G2/M期的细胞减少，S期细胞增加。同时，黄芩苷对HepG2放疗具有增敏作用。结论：黄芩苷可抑制人肝癌细胞增殖，可能与影响细胞周期有关；黄芩苷能增强肝癌细胞放射敏感性。

关键词：黄芩苷；肝癌；细胞增殖；放疗增敏

肝癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，预后差、病死率高，寻求可靠的综合治疗方案成为治疗肝癌的必经之路。黄芩苷是从黄芩中分离出来的黄酮类化合物，具有多种药理作用[1]。近年来发现黄芩苷具有抗脂质氧化，降低血脂、血压和抗肿瘤作用[2]。放疗是辅助治疗肝癌的有效手段之一，而如何更进一步增加放疗的效果，探索肝癌放疗的增敏剂无疑是个新途径。本研究旨在探讨黄芩苷联合放疗，对人肝癌细胞株HepG2增殖的抑制作用，以及黄芩苷对HepG2放疗敏感性的影响，为提高肝癌的治疗效果提供实验依据。

1 材料和方法

1.1主要材料及试剂

HepG2细胞购于中科院上海细胞所，DMEM培养基及胎牛血清购于Life公司。黄芩苷（Baicalin）购于上海纯优生物。CCK-8试剂盒购于博士德生物。细胞周期检测试剂盒购于北京碧云天。

1.2实验方法

1.2.1 细胞培养

人肝癌HepG2细胞培养于含10%灭活胎牛血清的DMEM培养基中, 置培养箱内培养。细胞分组：①阴性对照组；②黄芩苷组：不同浓度黄芩苷处理的HepG2细胞(黄岑苷粉末用细胞培养液稀释成工作浓度：0.1、0.25、0.5 mg/ml)；③放疗组；④黄芩苷与放疗联合治疗组：加入0.5 mg/ml黄芩苷培养12h后进行照射（X射线能量为6 MeV/u、靶皮距100 cm、剂量率2 Gy/min，细胞给予4Gy放疗）。

1.2.2 流式细胞仪检测肿瘤细胞周期分布

黄芩苷组细胞按0.1、0.25、0.5mg/ml黄芩苷处理后，于48h后分别进行消化计数。各个不同浓度组及阴性细胞组分别收集1×106个细胞。冷PBS洗涤2次后，按照细胞周期试剂盒说明书分别加入周期检测试剂，上流式细胞仪检测，并对细胞周期进行分析，实验重复三次。

1.2.3 CCK-8法测定肿瘤细胞增殖抑制率

按上述细胞分组，每组设6个复孔，在96孔板中相同条件下培养48 h 后，吸去培养液，按CCK-8试剂盒说明书加入试剂，在酶标仪上读取450nm处吸光度值，并计算细胞增殖抑制率。实验重复三次。

1.3 统计学分析 数据以x ±s 表示。采用SPSS16.0统计软件进行统计分析，两者比较采用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

经流式细胞仪检测发现：单独黄芩苷处理后，较阴性对照组相比，处于G0 /G1、G2 /M期细胞减少，S期细胞显著增加；单独放疗组G0/G1期细胞增加，S期细胞减少，G2/M期细胞变化较少；黄芩苷+放疗联合组较单独放疗组G0 /G1、G2 /M期细胞减少，S期细胞显著增加。CCK-8结果显示：随药物浓度增高，黄芩苷对HepG2细胞增殖的抑制率明显增高，呈浓度依赖性；联合组对HepG2细胞的抑制率较单独放疗组和黄芩苷组明显增高，组间比较具有统计学意义（P＜0.05）。（表1）

3 讨论

    放疗是常用的肝癌治疗手段, 但有效率并不高,主要原因是易复发转移和并发症。虽然提高放射剂量可提高局部控制率, 但增加了对周围正常组织的损害。寻找有效的放疗增敏方式进行联合治疗是当前肿瘤治疗的新出路。黄芩苷是中药黄芩中的主要活性成分。近年来，研究表明它对多种肿瘤具有抗瘤活性[3][4]。本研究选用人肝癌细胞株HepG2为研究对象，探讨了黄芩苷的抗肿瘤作用。结果表明，黄芩苷对HepG2细胞生长具有明显抑制作用；联合治疗组抑制率均高于单独使用黄芩苷组和单独放疗组，说明黄芩苷与放疗联合治疗对肝癌细胞的抑制有协同作用，黄芩苷能增加肝癌细胞放射敏感性。细胞周期实验的结果提示，黄芩苷可使HepG2细胞的细胞周期阻滞于S期，使进入G2 /M期的细胞比例降低，提示黄芩苷可能通过影响细胞周期进程并抑制HepG2细胞增殖，具体机制有待进一步探讨。随着对黄芩苷抗肿瘤作用机制的进一步认识, 黄芩苷有望成为具有较好疗效且价格低廉的一种协同抗癌药物，具有潜在的临床应用价值。

 

参考文献：

[1]黄志军.黄芩苷药理作用研究进展.天津药学，2012, (3) :0061-64.

[2]兰真,曾凡骏,曾里,等.生物类黄酮对心血管系统的调节及作用机理现代预防医学,2005,32(6):613.

[3]郭昱,姚树坤.黄芩苷对人肝癌SMMC-7721细胞系生物学行为的影响.中国中医基础医学杂志,2006,12(10):732-735.

[4] 汤立建，赵良才，李庆林,等.黄芩黄酮类成分抗肿瘤作用及机制研究进展.中国中药杂志,2007,32(1):21-26.