李佳林  李开军  黄林

成都生物制品研究所有限责任公司病毒性疫苗二室，四川成都610023  

摘要：明胶是水痘减毒活疫苗中常用的冻干赋形剂组分，是源于动物组织的大分子蛋白质。由于明胶可能引起疫苗接种后的不良反应，且与某些民族的宗教信仰相冲突,近年来WHO建议减少和避免明胶在病毒疫苗中的使用【1】。我国目前在疫苗冻干保护剂方面的研究与国外还有相当大的差距，明胶作为病毒性疫苗的冻干保护剂组分仍然广泛使用，但目前国内还没有相应的药用辅料标准，因此必须尽快建立相应的质量标准；同时还应对疫苗中明胶含量、分布情况、以及对病毒的稳定性研究和替代物等方面进行全面的研究，以便将来在疫苗生产中取消明胶的添加。本文主要对常规使用的冻干保护剂1和不含明胶的冻干保护剂2进行对比，以便筛选出更适合的水痘疫苗保护剂。

关键字：

     明胶   水痘疫苗  保护剂  赋形剂  冻干

材料与设备：明胶   LYO-13型冻干机 一定比例的冻干保护剂 水痘减毒活疫苗

原理：冻干是复杂的相变过程，冻干制品在整个过程存在着各种应力，包括低温应力、冻结应力、干燥应力等，它们常常是导致制品中蛋白质变性的因素，因此选择适宜的冻干保护剂十分重要。冻干保护剂可以改变制品冷冻干燥时的物理、化学环境，减轻或防止冷冻干燥或复水【2】对病毒的损害，尽可能的保持病毒原有的各种生理生化特性和生物活性。而明胶正是冻干水痘减毒疫苗中使用的赋形剂，但由于其是源于动物组织的大分子蛋白质，可能与疫苗接种后不良反应有关，因此在疫苗生产中少用和不用动物源性的大分子蛋白质是疫苗发展的趋势。本文将冻干保护剂1和不含明胶的冻干保护剂2进行对比，以便筛选出更适合的水痘疫苗冻干保护剂。

操作过程：本次水痘疫苗冻干保护剂的对比试验共分为2组，第一组为对照组，即含有明胶的水痘疫苗（常规生产用冻干保护剂）共制备一批。第二组为实验组，即不含明胶的水痘疫苗共制备3批。

    四个批次的水痘疫苗生产工艺和所用液体均相同。首先生产组从细胞组接过合格细胞后，用水痘病毒京-84对细胞感染，72小时后进行洗涤换液并观察病变，达到理想的病变后添加冻干保护剂，然后收获放于-70℃冰箱内冻存，取出单次收获物放在转瓶机上旋转融化破壁，完全融化后滤过合并即为半成品，然后对半成品抽样滴定。最后送分包装车间无菌灌装到2ml西林瓶中、半加塞，放置同一冻干柜中进行34小时的完全冷冻干燥。具体信息见下表：

类别 原液批号 原液滴(lgCCID50/ml) 制备量

第一组 TVP201204-02-A-3 5.1 4900ml

第二组 TVP201204-01-A-1 4.6 3200ml

TVP201204-01-A-2 4.48 3700ml

TVP201204-01-A-3 4.4 3900ml

 

 

冻干后，从每批水痘疫苗成品中抽取5支混合后进行成品滴度、热稳定、下降值(37 ℃放置l周后滴度不低于1lgPFU/0.5ml)、异常毒性、物理外观的检查。具体结果见下表：

第一组

成品批号 成品滴度(lgPFU/0.5ml) 热稳定性(lgPFU/0.5ml) 下降值 异常毒性 物理外观

T20120405 4.0 3.6 0.4 符合规定 很好

第二组

成品批号 成品滴度(lgPFU/0.5ml) 热稳定性(lgPFU/0.5ml) 下降值 异常毒性 物理外观

T20120401 3.8 2.7 1.1 符合规定 好

T20120402 3.7 2.3 1.4 符合规定 少量轻微碗底

T20120404 4.0 3.3 0.7 符合规定 很好

 

结果讨论：

1、传统明胶具有较好的冻干赋形效果，但亦可用其他物质取代冻干明胶的赋形剂地位，成品水痘疫苗的热稳定性不合格可能需要调整冻干曲线。

2、在冻干过程中，明胶在对水痘这类比较脆弱的病毒的保护中作用甚微，一般不考虑明胶对病毒的保护作用。

3、在实验结果比较中发现，取消明胶之后过敏反应降低，因此对于日益严格的生物制品行业标准来讲，取消明胶是有积极意义的【3】。

参考文献

【1】郑新添，严忠平 《冻干保护剂及其保护机理的研究进展》中国生化药物杂志

【2】孙东坡，胡一桥 《蛋白质药品冷冻干燥制品中保护剂及其保护机理》药学进展

复水：重新吸回水分，恢复原状，为冷冻干燥的逆过程。

【3】陆小军《对含明胶病毒活疫苗引起的过敏反应的最低发生率估计》《国外医学.预防.诊断.治疗用生物制品分册》2001年第03期【4】朱苟波，陈秀珍《腮腺炎疫苗保护剂的改进》中国生物制品学